由于在纽约自然历史博物馆担任警卫有出色表现，拉瑞（本·斯蒂勒 Ben Stiller 饰）出任某家电小公司的CEO，而且还在电视上接受了著名脱口秀主持人的访谈，儿子对他仰慕，爱情如影随形，一派春风得意的样子。不过，好景不长，当他故地重游，却意外发现馆长已经因为更新展览并准备把过时的展品挪到华盛顿的史密森博物馆继续展出。这让拉瑞感到有些气愤，他觉得自己有责任重振博物馆之雄风，于是他决定留下来再做一晚警卫，以唤起那些老朋友的共同努力。事实上，在搞定了罗斯福（罗宾·威廉斯 Robin Williams 饰）、林肯、拿破仑、伊凡雷帝和阿尔•卡邦等人之后，他遭遇了一个劲敌——邪恶的古埃及法老的卡门拉，二人在夜晚再度上演了博物馆的惊魂对决。
幕后花絮：
影片是第二部同时将亚伯拉罕·林肯和拿破仑作为影片的戏仿对象的电影，第一部是1989年的《阿比阿弟的冒险》。
原定影片于2009年春季公映，但20世纪FOX在春季档安排了大量的电影，所以延期到2009年5月公映。
与第一集一样，《博物馆奇妙夜2》的电影分级也是全年龄的PG级。
汉克·阿扎利亚曾在其主演的电影《神秘人》中与本·斯蒂勒有过合作；阿扎利亚也曾在本·斯蒂勒主演的《疯狂躲避球》和《遇见波莉》两部影片中有过友情客串演出。
影片是第一部在史密森尼博物馆中进行拍摄的电影。
影片制作方原本打算由瑞茜·威瑟斯彭扮演艾米丽亚·埃尔哈特。
影片已经是本·斯蒂勒和欧文·威尔逊第九次合作了；之前的作品分别是《有线电视修理工》、《永久的午夜》、《拜见岳父大人》、《超级名模》、《特伦鲍姆一家》、《警界双雄》、《拜见岳父大人2》和《博物馆奇妙夜》。
影片的编剧汤玛斯·蓝诺和罗伯特·本·加兰特分别饰演威尔伯·莱特和奥威尔·莱特。
克林特·霍华德（朗·霍华德的弟弟）在影片中出演一位飞行指挥官；他曾在哥哥指导的影片《阿波罗13号》中出演相同的角色。
电影评价：
抱着大爆米花坐了近两个小时，娱乐系数还蛮高的,看到豆瓣上很多人说这部片子无聊低幼，我看不见得.“邪恶轴心”的搞笑版，雷人的“伊凡雷帝”，只会摇头的智慧爱因斯坦，还有那两只小人的“真挚情感”，都还是挺有意思滴。哦，对了，还有中文翻译。翻译的相当到位，很本土化了。既然是一部轻松的电影，就用放松滴心态看看也不错。何必去以一个不存在的要求去要求它呢？
电影还是延续了上一集的风格，不过由于是续集，人们总期待能有新的惊喜，因此如果希望太大就难免失望，如果当作是全新作品来看，就还是会觉得新鲜有趣，能够进入到剧情中还是会觉得好玩。当然，福克斯是看中了第一集的票房来拍续集，想想目标观众的庞大，足以使其倾力出资，到最牛掰的博物馆拍摄。艾米亚当斯很抢镜，把stiller的风头吸走不少。笑料还有点稍微不够，如果搞笑的桥段设计得再多一些、再可乐一些就更好了。
博物馆奇妙夜系列电影:博物馆奇妙夜,博物馆奇妙夜2：逃离史密森尼,博物馆奇妙夜3：墓葬秘密。
